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            透射電鏡取材注意事項

            生物樣品透射電鏡取材注意事項

                    取材是電鏡實驗的第一步,其操作成功與否直接關系到電鏡結果的效果 及成敗。為了得到好的結果,請務必按要求做好取材!取材基本要點:快 (1min)、冷(4 ℃)、。1 mm3)、凈(無雜質)、準(部位準確)。不 同的樣品,取材細節上有很大區別,有任何疑問,請掃描右方二維碼,即可 獲得專業一對一電鏡實驗及解圖指導! 

            一、動物組織取材流程及要求

                   取材流程:動物麻醉或斷頭急性處死,解剖取出所需的器官或組 織,生理鹽水簡單沖洗血液及組織液。按要求將組織切成1mm3左 右小塊,固定于組織及細胞電鏡專用2.5%戊二醛固定液。

                   取材要求: 1、位置:肝、肺、脾等無需定位組織取1mm3組織,3-5塊;需要定位組織如骨骼肌、腎、腸、血管、胰島等組織取材大小為0.5mm× 1mm×3mm左右的長條狀,且保證觀察結構在組織塊中。                             2、操作:試劑、容器、器械提前4℃預冷;組織離體后,1min內浸 入戊二醛固定液。取材時,可提前準備一個載玻片(硬卡紙),滴 幾滴戊二醛固定液,把標本浸在液滴中修整至合適大。〞r間可稍 長),用牙簽挑出 3~5 粒標本,放入1.5ml尖頭EP管。將修整好的 標本塊放入戊二醛固定液后,普通 4℃冰箱保存。

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            二、細胞取材流程及要求

                   取材流程:細胞直接刮下(不可胰酶消化,會造成細胞損傷),細胞 懸液離心,棄上清,PBS 洗2次(敏感的細胞直接固定,不洗),低速 (1000-3000rpm)離心成團,加入組織及細胞電鏡專用2.5%戊二醛固定 液 4℃過夜后快遞。懸浮細胞、菌液可直接視為細胞懸浮液操作。固體 培養基培養的菌可直接將菌落挑到PBS中,后續操作一致。 

                   取材要求: 1、細胞數量充足(6cm 或10cm 皿長滿),離心后在ep管中綠豆大; 

                                     2、緩沖液、戊二醛固定液等PH值7.3-7.4,4℃提前預冷;

                                     3、貼壁細胞連著培養基用細胞刮斜著快速刮下,不要反復來回刮; 

                                     4、細胞懸液轉入離心管,1000-3000rpm離心成團,棄上清,加PBS,將細胞轉入1.5ml尖頭 ep管,再次離心后棄上清。再加PBS重復上述步驟,最后加2.5%戊二醛固定,4℃保存。操作 輕柔,盡量保證細胞不散開。(轉速及時間請結合細胞情況,盡量低轉速、短時間,以細胞 離心成團為準。≒BS 清洗時間過長,易造成細胞損傷);

            三、植物組織取材及要求

                  取材流程:PBS沖洗樣品,確保無泥沙等污染物。然后用鋒利刀片或剪刀將 樣品切成合適大小,裝入預冷的植物及細菌電鏡專用2.5%戊二醛中。不需要定位的樣品切成1立方毫米大。ㄈ缛~片、果實、花粉等),需要定位的 樣品,切成0.5mm×1mm×3mm的長條狀(莖、根、表皮等)隨后抽氣,讓組織能沉淀到管底。(簡易抽氣方法:將植物組織同固定液一起倒入注射器, 用乳膠手套食指堵住注射器出口,右手拉動針栓,將注射器口垂直向上, 松開食指,右手輕推針栓使液面上的氣泡從注射器口排出,反復多 次,直 至組織沉入固定液。)

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            四、其他樣品

                 懸浮細胞、細菌可視為細胞懸液操作。固體培養的細菌,可視為被切小的組織塊,直接用牙 簽挑取3-5個菌落即可。外泌體、納米材料、脂質體、病毒顆粒等負染樣品,根據樣品特 點,固定或不固定后合適條件運輸。具體可咨詢工作人員。

            五、樣本儲存運輸標準: 

                   儲存:樣本取材后,4℃保存時間不超過1個月。 

                   運輸:固定液充滿EP管,封口膜封口,氣泡膜或報紙包裹厚一些。最后泡沫盒+冰袋 的方式運輸,冰袋2-3個(-20℃冰袋,不要太多),一定要與樣品隔開。特殊樣品 如脂肪、植物等,用紗布將樣品壓到液面以下,保證充分固定。(下圖1)

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            六、郵寄地址:

            電話號碼:劉振 18317038349 

            業務郵箱:biofcen@163.com 

            地址:湖北省武漢市洪山區高新四路 40 號葛洲壩.太陽城 18 棟304-1(北 1) 

            網址:www.vishalsweets.com


            部分例圖展示:

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