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            详细内容

            細菌透射電鏡取材實驗注意事項

            1、細菌取材原則:

              細菌樣品結構簡單,一般分為液體培養及固定培養,觀察又分為常規透射電鏡或負染觀察。取材時要區分對待。取材前,先查閱文獻,明確實驗目的,設計好實驗流程,熟悉超微結構及分布,對需要觀察的結構及特點需要有自己的判斷。另外,戊二醛會影響抗原活性,如果課題需要做免疫性的實驗,取材時需要用不同的固定液固定。固定對取材用器材及試劑,進行清潔及預冷,寫好取材的標簽。取材時,務必做到相同條件下取材,相同人員平行操作。固定液一般為2.5%電鏡專用戊二醛。

            2、細菌取材操作方法:

              2.1、對于觀察細菌鞭毛、菌毛、納米材料附著于細菌的樣品:采用液體培養基培養。因為鞭毛容易脫落,在操作時盡量輕柔。對于能自然沉淀的細菌,可直接取細菌沉淀,PBS清洗2次,清洗時也讓細菌自然沉淀不要離心,操作會殘留部分培養基,但影響較小。如果細菌不能自然沉淀,只能低速離心,取沉淀固定。但是對于鞭毛易脫落的細菌,會有較大影響,我們會優先選擇新鮮菌液進行實驗。然后用2.5%戊二醛固定,4℃保存運輸。送樣時,同時提供新鮮菌液及戊二醛固定的菌液。

              2.2、對于觀察細菌內部結構的樣品:

              2.2.1、如果是液體培養基培養的細菌,可直接離心,棄上清,沉淀用PBS洗2次,加2.5%戊二醛固定。如果需要觀察到材料在細菌上的附著,操作盡量輕柔,能自然沉淀就不要離心。且清洗的時候要小心。防止材料脫落。

              2.2.2、如果是固定培養的細菌,可用牙簽挑取所需觀察的菌落,直接置于2.5%戊二醛固定液中,4℃保存及運輸。挑取的時候,盡量避免挑取培養基。


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