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            详细内容

            肺組織透射電鏡取材注意事項

            1、肺組織取材原則:

              肺組織結構較為簡單,取材前,先查閱文獻,明確實驗目的,設計好實驗流程,熟悉組織結構及分布,對需要觀察的結構需要有組織學位置判斷。另外,戊二醛會影響抗原活性,如果課題需要做免疫性的實驗,取材時需要用不同的固定液固定。肺組織盡量灌注取材,灌注請一定保證灌注充分,灌注充分效果會遠低于不灌注。對于未進行灌流固定的動物最好先進行電鏡標本的取材,以免組織自溶,影響超微結構的觀察。對取材用器材及試劑,進行清潔及預冷,寫好取材的標簽。取材時,務必做到相同條件下取材,相同人員平行操作。固定液一般為2.5%電鏡專用戊二醛,灌流固定選用3%多聚甲醛1%戊二醛。


            2、取材器材與試劑:

              冰盒、手術刀、手術剪、剃須刀片、EP管、2.5%戊二醛、蠟盤(光盤、載玻片均可)、封口膜、吸管、注射器。均4度預冷備用。


            3、取材流程(不灌注取材)

             3.1、取材基本要點:

              小:沒有方向的組織取材尺寸為1mm×1mm×1mm,有方向的組織為1mm×1mm×3mm為宜,3mm為長軸的方向。因為固定液的穿透能力只有0.5mm,若樣品過大會使內部固定不良;樣品過小時觀察的目標將受到局限。

              輕:取材刀片要鋒利,一般用剃須刀片,操作應始終貫徹動作輕柔。只做直線切割,避免對組織的擠壓及拉鋸,以免引起人工損傷。

              準:電鏡視野非常窄,所以取材的部位一定要準確可靠,根據研究目的要考慮到定位和定向的問題。

              冷:4操作、保存、送樣。盡量在低溫下操作,降低水解酶的活性,所用容器和器械應預冷,取好的標本放在4冰箱保存。

             3.2、肺組織取材具體操作:

              實驗動物麻醉、灌流充分,然后用粗的剪刀將動物斷頭,左手捏住大鼠兩耳,右手持剪刀剪開胸腔,取出組織,用鋒利的刀片切下一塊肺組織置于滴有預冷固定液的蠟板上,切成1立方毫米小塊每組3-5塊。肺泡中通常含有大量空氣,會造成組織漂浮,固定不充分?梢杂幂d玻片輕壓組織,排出空氣。(此步操作有可能會導致結構損傷,也可以用取材后抽氣代替)然后將切成1立方毫米小塊每組3-5塊。最后用牙簽將組織塊逐一放入盛滿固定液的EP管中。如果組織塊依然漂浮在固定液表面,可用紗布將組織塊壓到液面以下。最后將樣品管放入4冰箱,固定2~4h后郵寄。郵寄時固定液充滿EP管,封口膜封口,氣泡膜或報紙包裹厚一些。最后泡沫盒+冰袋的方式運輸,冰袋2-3個(-20℃冰袋,多了會凍壞樣品),一定要與樣品隔開。

            灌注取材較為費時費力。肺組織也可以不灌注取材。流程為:實驗動物麻醉,然后用粗的剪刀將動物斷頭,左手捏住大鼠兩耳,右手持剪刀剪開胸腔,迅速將預冷的2.5%戊二醛注射到需要觀測的肺組織處。然后迅速鋒利的刀片切下注射過戊二醛的組織并置于滴有預冷固定液的蠟板上,肺泡中通常含有大量空氣,會造成組織漂浮,固定不充分?梢杂幂d玻片輕壓組織,排出空氣。(此步操作有可能會導致結構損傷,也可以用取材后抽氣代替)然后將切成1立方毫米小塊每組3-5塊。最后用牙簽將組織塊逐一放入盛滿固定液的EP管中。如果組織塊依然漂浮在固定液表面,可用紗布將組織塊壓到液面以下。最后將樣品管放入4冰箱,固定2~4h后郵寄。郵寄時固定液充滿EP管,封口膜封口,氣泡膜或報紙包裹厚一些。最后泡沫盒+冰袋的方式運輸,冰袋2-3個(-20℃冰袋,多了會凍壞樣品),一定要與樣品隔開。


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