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            網站首頁 >> 送樣需知 >>送樣須知 >> 神經組織透射電鏡取材注意事項
            详细内容

            神經組織透射電鏡取材注意事項

            1、神經取材原則:

              神經組織結構較為復雜,取材前,先查閱文獻,明確實驗目的,設計好實驗流程,熟悉組織結構及分布,對需要觀察的結構需要有組織學位置判斷。另外,戊二醛會影響抗原活性,如果課題需要做免疫性的實驗,取材時需要用不同的固定液固定。神經組織可以不灌注取材,如果灌注,請一定保證灌注充分,灌注充分效果會遠低于不灌注。對于未進行灌流固定的動物最好先進行電鏡標本的取材,以免組織自溶,影響超微結構的觀察。對取材用器材及試劑,進行清潔及預冷,寫好取材的標簽。取材時,務必做到相同條件下取材,相同人員平行操作。固定液一般為2.5%電鏡專用戊二醛,灌流固定選用3%多聚甲醛1%戊二醛。


            2、取材器材與試劑:

              冰盒、手術刀、手術剪、剃須刀片、EP管、2.5%戊二醛、蠟盤(光盤、載玻片均可)、封口膜、吸管、注射器。均4度預冷備用。


            3、取材流程(不灌注取材)

              3.1、取材基本要點:

              小:沒有方向的組織取材尺寸為1mm×1mm×1mm,有方向的組織為1mm×1mm×3mm為宜,3mm為長軸的方向。因為固定液的穿透能力只有0.5mm,若樣品過大會使內部固定不良;樣品過小時觀察的目標將受到局限。

              輕:取材刀片要鋒利,一般用剃須刀片,操作應始終貫徹動作輕柔。只做直線切割,避免對組織的擠壓及拉鋸,以免引起人工損傷。

              準:電鏡視野非常窄,所以取材的部位一定要準確可靠,根據研究目的要考慮到定位和定向的問題。

              冷:4操作、保存、送樣。盡量在低溫下操作,降低水解酶的活性,所用容器和器械應預冷,取好的標本放在4冰箱保存。

              3.2、神經組織取材具體操作:

              實驗動物急性處死或麻醉,用粗的剪刀將動物斷頭,左手捏住大鼠兩耳,右手持剪刀從鼠背側頸部將頭皮沿正中線剪開,然后用持針器沿鼠頸部著手向上剝除顱骨,取出腦組織,用鑷子捏住延髓將腦組織放于預冷的蠟板上,用鋒利的刀片沿大腦縱裂矢狀切為兩半,用注射器將預冷的2.5%戊二醛固定液沖入側腦室預固定,去除側腦室上外側壁的腦組織,將海馬從剩余腦組織上剝離下來,置于滴有預冷固定液的蠟板上,切成1立方毫米小塊每組3-5塊。最 后用牙簽將組織塊逐一放入固定液的EP管中。放入4冰箱,固定2~4h后郵寄。郵寄時固定液充滿EP管,封口膜封口,氣泡膜或報紙包裹厚一些。最后泡沫盒+冰袋的方式運輸,冰袋2-3個(-20℃冰袋,多了會凍壞樣品),一定要與樣品隔開。


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